如何防止尿液DNA降解
尿液中的DNA降解速度很快,这成为其在个体识别中的应用的障碍。我们如何防止尿液DNA降解,提高其在法医中的应用价值?
尿液中含有哪些促进DNA降解的物质
尿液中含有尿素、尿酸、肌酸、矿物盐、激肽酶等多种物质,这些物质会促进DNA的降解。尿液中的细菌也会分解DNA。此外,尿液中的PCR抑制因子如β-人绒毛膜促性腺激素也会降低DNA提取效率。
降低温度能防止DNA降解吗?
多数研究采用低温保存尿液样本,以防止DNA降解。但是,低温也会使尿液中的结晶体沉淀,形成沙状物,这些沉淀物会干扰DNA的提取。因此,仅仅降温无法完全防止DNA的降解。
添加UTI抑制酶能提高DNA稳定性吗?
UTI(尿激酶抑制剂)是一种特异性抑制胰腺酶的药物,可用来防治胰腺炎等疾病。研究表明,在尿液样本中添加UTI,可以抑制蛋白酶对DNA的降解,从而提高DNA的稳定性。适量的UTI可使尿液中的DNA保持可检测状态更长时间。
Tris-EDTA能够提高DNA提取吗?
尿液中的Tris-EDTA可通过螯合钙、镁等阳离子,起到抗钙化的作用,减少尿酸盐和氧化钙的沉淀,避免其对DNA提取的干扰。此外,Tris-EDTA还可增加尿液pH值,抑制在酸性条件下形成的尿酸结晶。因此,适量的Tris-EDTA也可提高DNA的提取效率。
小批量处理是否也有利于DNA提取?
大量的尿液样本中含有更多的盐分,这会干扰DNA从尿液中提取出来。研究表明,将样本分为小批量处理,然后再汇聚DNA提取,可以提高DNA回收率,获得更完整的微生物组信息。
综上,为提高尿液DNA稳定性,可在样品收集后及时加入适量UTI,然后低温保存;提取DNA时将样本分割小批量处理,避免过量盐分的干扰,从而提高尿液中DNA的提取效率。这对于进一步开展尿液个体识别研究具有重要意义。
参考文献
1. Suhua Zhang, Shumin Zhao, Ruxin Zhu, Gong Zhang, Chengtao Li, [UTI preventing DNA degradation of storing urinary samples for genotyping](https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S1875176811000023), Forensic Science International: Genetics Supplement Series, Volume 3, Issue 1, 2011
2. Ackerman AL, Anger JT, Khalique MU, Ackerman JE, Tang J, Kim J, Underhill DM, Freeman MR; NIH Multidisciplinary Approach to the Study of Chronic Pelvic Pain (MAPP). [Optimization of DNA extraction from human urinary samples for mycobiome community profiling.](https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6483181/) PLoS One. 2019 Apr 25;14(4):e0210306. doi: 10.1371/journal.pone.0210306. PMID: 31022216; PMCID: PMC6483181.
3. Munch MM, Chambers LC, Manhart LE, Domogala D, Lopez A, Fredricks DN, Srinivasan S. [Optimizing bacterial DNA extraction in urine.](https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6759279/) PLoS One. 2019 Sep 24;14(9):e0222962. doi: 10.1371/journal.pone.0222962. PMID: 31550285; PMCID: PMC6759279.
文章为麦瑞科林原创，如需转载，请注明文章链接和出处。
